细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10)

产品货号：

KFS213

中文名称：

细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10)

英文名称：

JC-10 Apoptosis Detection Kit

产品规格：

10T|20T|50T|100T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒可应用于细胞、组织或纯化的线粒体膜电位检测。采用阳离子脂质荧光染料JC-10作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-10可以选择性地进入线粒体，且由于膜电位的增加，其颜色会发生从绿色到橙色的可逆性改变。这种特性是由于JC-10聚合物的可逆结构，在膜极化条件下，它的发射光由520nm(JC-10单体发射光)转移到570nm (J-聚合体发射光)。当在490nm处激发时，JC-10发生从绿色到橙绿色的可逆改变。这两种颜色都可以被流式细胞仪上装好的一般滤光器检测到，因此绿色发射光可以通过荧光通道1(FL1)进行分析，橙绿色发射光可以通过荧光通道2(FL2)进行分析。它除了有潜力用于流式细胞术，也可以用于荧光成像分析。。

大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位(△ψ)的破坏，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。

产品组成

组分	10T	20T	50T	100T	保存条件
JC-10	10μL	20μL	50μL	100μL	-20℃避光
10×Incubation Buffer	2mL	4mL	10mL	20mL	2～8℃

保存：-20℃，有效期1年。

自备器材

流式细胞仪或荧光显微镜、高速离心机、CO₂培养箱、微量移液器
1.5mL Microtube、载玻片、盖玻片(荧光显微镜观察需用)、PBS、灭菌去离子水

注意事项

微量试剂取用前请离心集液。
JC-10避光保存及使用。
细胞培养至汇合度80～90%，收集细胞量在1×106/T。
对PH变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清取代Buffer孵育染色及洗涤，或延长观测时间。
流式细胞仪检测线粒体膜电位变化受到多种因素的影响，因诱导剂、细胞株类型，作用时间的不同而荧光强度比例都有不同，因此没有通用标准的补偿设门指南，因此每个试验需设阴性及阳性对照组进行荧光补偿及设门。
组织需先制备单细胞悬液或提取纯化线粒体后方可进行检测，可选用百奥莱博细胞悬液制备试剂盒(货号：KFS439)或线粒体提取试剂盒(货号：KFS440)。

用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性对照组和阳性对照组【用适当的凋亡诱导剂(如星形孢菌素，staurosporine)，诱导适当时间后经其它检测(如AnnexinV或Caspase 3活性)证实确有凋亡产生】，收集细胞；
用PBS洗涤细胞二次(离心2000rpm，5min)；
取100μL 10×Incubation Buffer加900μL灭菌去离子水稀释成1×Incubation Buffer，混匀并预热至37℃；
吸取500μL 1×Incubation Buffer，加入1μL JC-10，涡旋混匀配成JC-10工作液；
取500μL JC-10工作液将细胞均匀悬浮，37℃，5%CO₂的培养箱中孵育15～20min；
室温离心(2000rpm，5min)收集细胞，用1×Incubation Buffer洗两次；
吸取500μL 1×Incubation Buffer重新悬浮细胞；

荧光显微镜观察
1. 滴一滴上述细胞悬液于载玻片，盖上盖玻片，于荧光显微镜下观察；
2. 对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；用PBS洗涤细胞两次；
3. 滴加100μL JC-10工作液，加盖玻片，37℃，5% CO₂的培养箱中孵育15～20min；1×Incubation Buffer洗涤1～2遍；将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下观察：
  1. 正常细胞：双色滤光片观察则为：绿++红++(高绿高红)，如在同一滤光片下观察则为黄绿色
  2. 凋亡细胞：双色滤光片观察则为：绿++红+(高绿低红)，如在同一滤光片下观察则为绿色
流式细胞仪分析
用流式细胞仪检测(Ex=488nm;Em=530nm)细胞凋亡的情况，绿色荧光通过FITC通道通常为FL1来检测；红色荧光通过PI通道通常为FL2来检测。
正常细胞{FL-1亮，FL-2亮;R1}，凋亡细胞{FL-1亮，FL-2暗;R2}，设门的位置根椐细胞种类、实验条件等不同而变化，试验需设未经处理的正常细胞为阴性对照组和阳性对照组，根椐阴性和阳性对照组的双参数散点图来设定门的位置。

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